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你真的了解ABI PCR仪了吗?
点击次数:133 发布时间:2019-10-16
   你真的了解ABI PCR仪了吗?
  在进行ABI PCR仪试验的过程中,ABI PCR仪的扩增效率是一个非常重要的影响因素,因为定量PCR原理的理论方程是基于扩增效率zui大值1,因此高的扩增效率能保证定量PCR实验的性及重复性,影响ABI PCR仪扩增效率主要有以下几个方面:1,扩增子的长度;2,扩增子的GC含量;3,扩增子、引物和探针的二级结构;4,PCR反应各组分的浓度;5,RNA或者cDNA的纯度。
  进行ABI PCR仪试验时,必须设计好引物和探针,除了能获得高的扩增效率外,对ABI PCR仪的特异性、消除基因组DNA的扩增及提高扩增的灵敏度都有很大的影响。
  现在,ABI PCR仪已成为一种潮流。反应时间从90分钟缩短到30分钟,是受欢迎的,毕竟谁也不想在预约ABI PCR仪时排队等太久。温度循环是所有PCR的基础。ABI PCR仪的变温速率将决定PCR运行的整体速度。毫无疑问,变温越快,PCR运行也越快。宣传资料往往也会首先展示zui高变温速率以暗示ABI PCR仪运行速度更快。因此,在拿到参数表时,我们首先会留意变温速率,也就是升降温速率。
  当然,样品的变温速率可没有模块那么高。这就好比在炉子上烧水,炉子很快就达到100oC以上,但水可能只有50oC。模块的热量传递到样品还需要一定的滞后时间。因此,只根据模块温度编程而不考虑样品体积的变温速率并不能算准确。这个参数能反应仪器根据体积来控制样品达到设置温度、遵循预设的实验方案运行的真实能力,更有效地评估ABI PCR仪的真实性能。
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